Kei te uho o nga mahi ora katoa me nga rongoa rongoa hou kei te takoto te here peptide. Ko tenei hononga kovalent turanga e piriti ana i nga waikawa amino ki te hanga ngota ngota koiora. Ko te neke i nga whakamaramatanga pukapuka o mua, ma te mohio ki tenei hononga matū e tohu tika ana i te angitu arumoni i roto i te hangarau koiora. Ko te whakahiato pūmua māori e mahi hee ana i roto i te ribosome pūtau, e tutuki pai ai. He rerekee, ko te whakahoki ano i enei here i te tauine ka whakauru mai i nga arai miihini nui. Ko te hekenga o te hua, ko te korenga o te ma, me te rahungatanga o te pumau ka pa ki nga tatūnga taiwhanga me nga raina hanga arumoni. Me mohio koe ki nga ahuatanga matū o te hanga here me te wehenga kia tika te arotake i nga tikanga whakahiato. Ka tuhurahia he pehea te paanga o te pakari o te hanganga ki te whakamanatanga tātari me nga rautaki whakatakotoranga. I te mutunga, ma enei maaramatanga mahi e arahi i a koe ki te kowhiri i nga hoa whakangao tino kaha mo te ritenga peptides.
Ripanga Ihirangi
Te Maama Hanganga: Ko nga here Peptide e whakaatu ana i te ahua o te herenga-rua, e tohu ana i te pumau me te hangahanga 3D o nga rongoa rongoa me nga reagents.
Ko te Whakakotahitanga Pounamu: Ko nga tauhohenga whakakoi i roto i nga taiao taiwhanga (penei i te SPPS) me tino arotau ki te aukati i nga raupapa tapahi me te whakahiato.
Nga Tikanga Analytical: Ko te whakamana i te pono o te here e hiahia ana kia kaha te whakamatautau chromatographic me te spectrometric (HPLC, MS) hei whakarite i te rangahau, i te maatanga-haumanu ranei.
Kōwhiringa Hoa: Ko te neke mai i te ariā ki te tauhokohoko me tono he hoa whakahiato kia arotakengia mo te tauineine, te maamaatanga o te QA/QC, me nga rautaki whakaheke morearea.
Ka hangaia e nga punaha koiora nga pūmua matatini na roto i te tauhohenga whakahiatotanga whakamaroketanga. Ko te roopu carboxyl o tetahi waikawa amino ka tauhohe tika i roto i tenei mahi. Ka herea ki te roopu amino o tetahi waikawa amino patata. Ko tenei tauhohenga matū motuhake ka tukuna he ngota ngota wai kotahi hei hua. Ko te hononga kovalent ka puta ko te tuara tuatahi o te katoa peptides . Ka noho hei turanga hangahanga taketake hei pupuri i te ora. Ka kiia tenei hononga motuhake he here amide. Kua rangahauhia e nga tohunga kemu ona ahuatanga motuhake mo nga tekau tau ki te mohio ki te hoahoa tarukino.
Ko te here waro-hauota ehara i te here kotahi ngawari. Ka wetewete tonu nga irahiko puta noa i te hāora, te waro, me te ngota hauota. Ka hangaia e tenei tiritiri irahiko he hanganga resonance motuhake. Ka whiwhi te here i tetahi wahanga herenga-rua. Kaore e taea te huri noa i te waahi. Ko nga ngota e ono ka mau tonu ki roto i te ahuahanga maataki. Ko te whirihoranga whakawhiti ka tino paingia. Ma tenei ka aukati i nga taupatupatu kino i waenga i nga mekameka taha tata. Ko te Proline he tohu onge noa ka puta nga whirihoranga cis. Ko tenei raka ahuahanga e whakatiki ana i te ngawari o te ngota.
He aha te take i tino nui ai tenei rigidity? Ka pa ki te hoahoa me te angitu o nga rongoa rongoa. Ko te kore o te hurihanga ka whakamanahia nga ritenga ahu-toru motuhake. Ko enei ahua matapae ka whakatau i te hononga hono kaiawhina pūtau. Ka maru hoki te rigidity i te tuara rāpoi mai i te paheketanga tere o te enzymatic. Ka whakaroahia te roa o te mahi o nga hanga rongoa arumoni. I te wa e hoahoa ana nga kairangahau i nga pūhui waihanga, ka whakawhirinaki nui ratou ki tenei ahuahanga matapae. Ko te ahua o te mahere e tohu ana i te katoa o te koiora koiora. Mena he ngawari te here, ka kore e mau nga raau taero ki roto i nga kaiwhakawhiwhi pūkoro.
Āhuahira Biochemical |
Taonga Tinana |
Putanga Tauhokohoko |
|---|---|---|
Te Wehenga Resonance |
He pūāhua here-rua |
Ka aukati i te hurihanga o te tuara, me te whakapumautanga o te hanganga. |
Hangahanga Mahere |
Whakaritea te whirihoranga whakawhiti |
Ka whakaiti i te tukinga o te taha-mekameka, te whakapai ake i te hononga o te kaiwhakawhiwhi. |
Te Waihanga wai |
Hononga tuara kovalent |
Me whai whakaurunga hiko motuhake, he whakararu i te tauine waihanga. |
Ko te whakamaoritanga koiora he pai te whakamahi i te ribosome pūkoro. He tino pai tenei miihini koiora me te tino whakahaere. Ka honoa nga waikawa amino i roto i nga taiao wai. He rereke te mahi o te whakahiato matū i roto i te waahi taiwhanga. Ko te Solid-Phase Peptide Synthesis (SPPS) te paerewa arumoni hou. Ka hiahiatia he tauhohenga honohono waihanga matatini penei i te HATU, DIC ranei. Me tiaki tatou i nga roopu mahi motuhake i te tuatahi. Ko nga roopu whakamarumaru noa ko te Fmoc, Boc chemistries ranei. Na, ka wetewete maatau ma te whakamahi i nga turanga ngawari, waikawa ranei. Ka hoki ano tenei huringa pukuriri mo ia waikawa amino ka taapirihia. Ko nga ahuatanga matū e tohu ana i nga mana whakahaere o te taiao. Me kaha tatou i te tauhohenga kia mahi maori nga punaha koiora.
Kei te noho whakaraerae ahakoa te kaha o te ahua kovalent. Ko te cleavage, he maha nga wa e peia ana e te hydrolysis, ka noho tonu hei riri ahumahi. Ko etahi ahuatanga o te taiao ka tere ake te paheketanga matū. Me tatari koe ki enei ara pakaru i te wa e hangai ana.
Ko nga taiao pH tino kaha ka whakararu i nga toenga hiko tino nui, ka tere te hauwai.
E kaha ana nga whākōkī proteolytic ki te aro me te wehe i nga kaupapa raupapa waikawa amino motuhake.
Ko te ahotea waiariki nui ka whakauru mai i te kaha nekeneke, ka pakaru nga hononga tuara i te wa oata.
Ko te whakakino moroiti ka whakauru i nga mahi enzymatic kore-whakaritea ki roto i nga hanganga parakore.
Ko te nui o te makuku ambient ka puhoi te pirau hydrolytic i roto i nga paura lyophilized hiri kore tika.
Ko te arotake i enei tepe pumau me tino whai paearu. Kaore e taea e koe te hanga i nga hua arumoni ma te matapo. Ko nga raru o te pakaru ka whakatau i nga kawa rokiroki i te ao katoa. Hei tauira, ko nga paura lyophilized e hiahia ana kia mau tonu te pāmahana iti-kore. Ko nga hanganga wai e hiahia ana ki nga maatete whakamaarama tino motuhake. Me kaha te aukati i te makuku me te rama UV. Ko enei here kaha e pa ana ki te oranga arumoni me nga mahi tuku kaipuke. Mena ka pakaru wawe te hononga o te tuara, ka ngaro te kaha o te rongoa. Ko nga tari whakahaere pera i te FDA e tono ana i nga raraunga pumau mo nga tau maha. Me whakaatu koe kei te mau tonu te tuara i roto i te waa.
Ko te mana o te kounga he wero nui mo te hanga ngota. Me tino whakaatu koe i te tika o te hanganga i mua i tetahi tono. He tino uaua te wehe i te ngota ngota i whngaia mai i te whakahiatotanga. Ko nga raupapa kua tapatapahia e tino whakaata ana i te hua whakamutunga e hiahiatia ana. He ngawari te huna o nga poke whakakore i roto i nga ranunga matū uaua. Ko te hononga kotahi e ngaro ana ka pakaru te raupapa katoa. Kei te hiahia koe ki nga tikanga tātari pakari, tino tohunga ki te manatoko angitu.
Tikanga tātari |
Mahi Tuatahi |
Tawhā Whakamana Whainga |
Hōputu Huaputa |
|---|---|---|---|
HPLC |
Wehenga Chromatographic |
Te purenga raupapa katoa |
Koromatogram teitei |
Papatipu Spectrometry |
Ine Papatipu Ion |
Te taumaha ngota ngota |
Kauwhata papatipu ki te utu |
NMR Spectroscopy |
Atahanga Resonance Magnetic |
Whakapumautanga hanganga tuarua |
Hurihanga nekehanga matū |
FTIR Spectroscopy |
Te Maama Whakawhitinga Infrared |
Te noho here a Amide |
Ko nga tihi whakauru |
Ko te High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) ka noho tonu hei paerewa koura mo te ao. Ka wehea e ia nga pūhui i runga katoa i te hydrophobicity. Ka wehe te HPLC i te whainga roa mai i nga poke poto kua tapahia. Ka hoatu ki a koe he ōrau parakore mārama, whainga. Ko te Mass Spectrometry (MS) ka manatoko tika i te taumahatanga ngota. Ko te ESI me te MALDI-TOF e tohu ana i nga tikanga e whakamahia ana. Ka whakaratohia e MS te whakapumautanga raupapa hirahira tonu. Ka whakarite kia hono tika nga waikawa amino katoa i te wa whakahiato. Ka kite i nga rereketanga papatipu iti na te ngaro o nga roopu whakamarumaru ngawari.
Ko te Resonance Autō Nuclear (NMR) me te Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) e whakamana ana i nga huānga hohonu ake. Ka whakapumau ratou i te aroaro o te here amide motuhake. Ka awhina i nga kairangahau ki te whakatakoto tika i nga hanganga tuarua. Ka kitea e enei taputapu he alpha-helices, he pepa-beta ranei e hanga ana i roto i te mekameka. He mea tino nui te whakamaoritanga raraunga mo nga kaihoko rawa. I te arotake i te Tiwhikete Tiwhikete a te kaiwhakanao (CoA), tirohia. Tonoa nga chromatograms HPLC e whakaatu ana i nga tihi koi. Me whakarite kia taurite nga raraunga MS ki te papatipu kua whakaritea. Ko Vague CoAs te tohu i nga hapa o te hangahanga, i nga poke huna ranei. Me tohu tohu mo te kounga o te hua i mua i te haere.
Ko te whakahiatotanga matū whakangao e whakaatu ana i nga kohungahunga taiwhanga taiwhanga puta noa i te ao. Ka tino heke te hua i roto i nga raupapa tino roa. Ka tere te whakakotahi i nga ngoikoretanga ki nga waikawa amino katoa. Ko te mooni pāngarau o te whakahiato raupapa he kore e murua.
Ko te 99% te pai o te hono mo ia taahiraa ka puta mai i te 60% te ma mo te 50 nga hikoinga.
Ma te 95% te pai ka heke te hua o te raupapatanga ki te 7% noa iho.
Ko nga mekameka rahunga kua tapatapahia ka kore e tino rerekee mai i te papatipu mutunga.
Ka piki ake nga utu mo te purenga na te mea ka piki te roa o te raupapa ki tua atu i te 30 toenga.
Ka whakararu i nga mahi whakahiato nui-nui. Ko nga mekameka taha nui ka aukati i te waahi hohenga. He maha nga wa ka puta te whakahiatotanga i roto i nga raupapa hauwai. Ka huri whakamuri te mekameka matū e tipu ana ki a ia ano. Ko tenei whakakopa ka huna katoa i te roopu amino reactive. Kaore e taea e nga reagents hono paerewa te uru ki te papatipu whakahiato mato. Hei karo i tenei, ka whakamahia e nga tohunga kemu nga whakarewa pararopi motuhake. Ka whakaurua e ratou he maataki chaotropic kaha ki te whakararu i te hononga hauwai. I etahi wa, ka whakamahia te whakamahana ngaruiti hei wehe i nga mekameka. He maha nga wa ka whakakapihia e nga kairangahau nga pseudo-prolines ki te aukati i tenei kotuituitanga o mua.
Ka kaha hoki te whakatauira i nga whakatau putea uaua. Ka anga koe ki te utu i nga wa katoa me nga tauhokohoko parakore i ia ra. Ko te 99% te purenga tino teitei e hiahia ana kia nui te purenga HPLC. Ko tenei tukanga motuhake ka pau te nui o te utu nui, whakarewa morearea. Ka whakaekea ano e ia te nui o nga hua rawa i te wa e wehea ana. Ko nga tono haumanu in vivo e kii ana i tenei purenga tino kore. He rereke, ka taea e nga tono rangahau in vitro taketake te 85% te pokekore. Me whakapau kaha koe ki te whakataurite i nga moni moni ki nga whakaritenga whakamatautau kaha. Ko te kowhiri i te karaehe parakore ka pakaru nga putea me te whakararu i nga raraunga whakahirahira.
Ko te neke mai i te ariā ariā ki te tauhokohoko katoa me whai hononga rautaki. Me tino aromatawai koe i nga kaha hangarau i mua i te hainatanga kirimana. Ka taea e te kaihoko whiriwhiri te whakahaere i nga raupapa tino uaua? Rapua he wheako manatoko mo nga waikawa amino koretake. Tirohia to ratou kaha tinana ki te whakahiato i nga hanganga porohita herea. Whakatauhia mena ka whakamahia e ratou nga tikanga-waa-waa-waa-waa ranei. He pai ake te mahi a LPPS mo nga raupapa arumoni tino poto, nui-nui. He pai ake te whakahaere a SPPS i nga raupapa rangahau tino uaua. Me whakahāngaitia e te kaihoko a raatau hangarau ki to ngota ngota.
Ko te whakapumautanga o te kounga ka wehewehe i nga hoa rongonui mai i nga taiwhanga whakahiato taketake. He rereke nga mahi hanga-rangahau mai i te tino hanganga ture cGMP. Ko nga Mahinga Whakangao Pai o naianei e hiahia ana ki nga mana whakahaere taiao. Me pupuri tonu te Kaihokohoko i nga Tikanga Whakahaere Paerewa (SOP) kua tuhia. E hiahia ana ratou kia whakatapua, kia tino aro turukihia nga ruma horoi mo te whakaputa. Ko te aro turuki i te kounga o te hau taiao me haere tonu me te kore e aukati. Me tono koe i nga purongo kaute kaute e whakaatu ana i o raatau paerewa hanganga.
Ko te maaramatanga o nga raraunga kaore e taea te whiriwhiringa mo nga kaihoko nui. Whakaritehia nga tumanakohanga mo te ripoata moata i roto i nga korerorero. Tonoa nga purongo wetewete kia tukuna me ia puranga kotahi. Ko nga tohu HPLC me te MS spectra he tino whakahau. Tonoa nga raraunga whakaū raupapa matawhānui ki mua. Mena ka ruarua te kaihoko ki te tiri i nga raraunga tātari mata, haere tonu atu. I te nuinga o te waa ka tohu i nga ngoikoretanga o te mana kounga.
Aromātai i nga rautaki whakaheke morearea me nga waa huri noa. He maha nga rahunga o te whakahiatotanga i roto i te matū matatini. Ko te hoa pai ka korero wawe i enei take hangarau. Ka arotauhia e ratou nga hikoi honohono whakawero me te kore akiaki. Ka kaha te whakatikatika i nga kawa o roto ki te whakatutuki i nga wa tino kaupapa. Ka whakatutukihia e ratou tenei me te kore e patu i te parakore o nga hua whakamutunga. Ko te hitori o te kaihoko kaha e tohu ana i te pono o nga mahi a meake nei. Kei te hiahia koe ki tetahi hoa tino mohio ki te whakatere i nga arai matū.
Ko te whakahaere i te matū taketake o te here peptide ko te timatanga noa iho. Ko te whakamaoritanga o taua matū ngawari ki roto i te hanga pono, whakaineine e tohu ana i te wero arumoni pono. Kua tirotirohia e matou te ahua o te pakari o te hanganga ki te pumau me te mahi koiora. I tirotirohia e matou he aha te whakahiatotanga raupapa e whakauru ana i te hekenga hua pangarau e kore e taea te karo.
Ko te manatoko wetewete pakari ka noho hei parepare tino kaha ki te paheketanga me te kore o te whakahiato. Ko nga hononga a nga kaihoko rautaki e whakaiti ana i nga raru nui kei roto i te pikinga matū. Hei kaihoko hangarau, kairangahau ranei, me tono kia tino marama. Arotakehia o kawa whakahiato o naianei ki nga paerewa tātari hou. Tonoa nga korero hangarau mo nga raupapa neke atu i te toru tekau nga toenga. Arotakehia nga tauira CoA i mua i te whakauru ki nga kirimana whakangao ritenga nui.
A: Ahakoa ko nga here peptide katoa he here amide hangarau, kei roto i te horopaki koiora o te waikawa alpha-amino. Ka hono ratou i te roopu alpha-carboxyl o tetahi waikawa amino ki te roopu alpha-amino o tetahi atu. Ko tenei whakaritenga koiora motuhake e hanga ana i te whakapumautanga oro ahurei, e akiaki ana i te maataki, te hangahanga mahere e tika ana mo te whakakopa pūmua.
A: Ko te waiwai te take tuatahi o te paheketanga o te hanganga. Ko te makuku hei whakakorikori, ka motu i te hononga kovalent. Ka tere tere tenei tauhohenga i te wa tino rerekee o te pH, te rongo ki te teitei o te mahana, i te wa ranei ka uru mai te whakakino microbial aitua ki roto i te taiao rokiroki.
A: Me whai taapiri raupapa. Mena kei te 99% te pai o nga hikoi hono katoa, ko te 1% te reeti rahunga ka uru ki te pangarau. Neke atu i te 50 nga kaupae karapīpiti, ka heke te hua katoa ki te 60%. Ko te aukati me te whakahiato mekameka ka aukati i nga waahi hohe, me te whakarite kia kore e oti nga tauhohenga hono i te mea ka roa te mekameka.
A: Me tono e koe he Tiwhikete Tiwhikete e whakaatu ana i nga ripoata tātari takirua. Me tono chromatograms HPLC taumira teitei hei whakamatau i te poke o te tauira me te tautuhi i nga poke kua tapahia. I te wa ano, me tono raraunga Mass Spectrometry (MS) ki te manatoko i te taumaha o te ngota ngota, te whakarite i te tika o te raupapa me te tango tika i nga roopu tiaki.
