Лиофильжүүлсэн эсвэл хөлдөөж хатаасан, Пептидүүд үр дүнтэй ажиллахын тулд маш нарийн нөхөн сэргээх шаардлагатай байдаг. Зохисгүй харьцах нь ихэвчлэн хурдан доройтож, үр ашгаа бүрэн алдаж, үнэ цэнэтэй материалд дэмий хөрөнгө оруулалт хийхэд хүргэдэг. Сэргээх нь тогтвортой, хэрэглэхэд тохиромжтой уусмалыг бий болгохын тулд хуурай нунтагт шингэн шингэрүүлэгч нэмэх чухал үйл явц юм. Энэ алхам нь идэвхгүй химийн бүтэц болон идэвхтэй биологийн нэгдлүүдийн хоорондын зөрүүг арилгах болно. Хэрэв та энэ протоколыг яаравчлах эсвэл буруу уусгагч хэрэглэвэл нарийн молекулын холбоог туршилтын үе шатанд хүрэхээс өмнө бүрмөсөн устгах эрсдэлтэй. Энэхүү иж бүрэн гарын авлагад та эдгээр нэгдлүүдийг аюулгүй хольж, удаан эдэлгээг нь нэмэгдүүлэхийн тулд хадгалах яг стандартчилсан протоколуудыг сурах болно. Бид шингэрүүлэгчийн сонголт, ариутгасан бэлдмэлээс эхлээд тунг зөв тооцоолох хүртэл бүх зүйлийг хамардаг. Анхааруулга: Доор дурдсан протоколууд нь зөвхөн боловсрол, судалгаа эсвэл лабораторийн хэрэглээний зорилгоор зориулагдсан болно.
Агуулга
Ариутгалын талаар тохиролцох боломжгүй: Эмнэлзүйн түвшний ариутгасан бэлдмэлийг хэрэгжүүлэх нь бохирдол, бактерийн өсөлтөөс сэргийлдэг.
Шингэрүүлэгчийг сонгох нь амьдрах чадварыг тодорхойлдог: Бактериостатик ус нь стандарт боловч тодорхой пептидийн профиль (гидрофил ба гидрофобик) нь ариутгасан ус, цууны хүчил эсвэл DMSO шаардлагатай байж болно.
Механик эмзэг байдал: Пептидүүд нь шилжилтийн стресст мэдрэмтгий байдаг; савыг хэзээ ч сэгсэрч болохгүй. Молекулын холбоог хадгалахын тулд зөөлөн эргүүлээрэй.
Хүйтэн гинжний хадгалалт: Бүтцийн бүрэн бүтэн байдлыг хадгалахын тулд пептидүүдийг сэргээсний дараа хөргөгчинд (ихэвчлэн 36 ° F-аас 46 ° F) гэрлээс хамгаална.
Үйлдвэрлэгчид хамгийн их тээвэрлэдэг пептидүүдийг лиофильжүүлсэн нунтаг хэлбэрээр . Энэхүү хөлдөөх хатаах процесс нь нэгдлээс усыг зайлуулж, амин хүчлийн цогц бүтцийг хадгалдаг. Хуурай нөхцөлд химийн нэгдлүүд нь удаан хугацааны тогтвортой байдалд хүрдэг. Тэд дэлхийн хэмжээнд дамжин өнгөрөх температурын хэлбэлзлийг амархан даван туулж чаддаг. Усгүй бол ферментийн задрал бүрэн зогсдог. Нунтаг нь шингэн уусгагчийг нэвтрүүлэх хүртэл идэвхгүй, маш тогтвортой хэвээр байна.
Энэ нунтгийг зөв бүрдүүлж чадахгүй бол химийн ноцтой эрсдэл дагуулдаг. Буруу нөхөн сэргээлт нь амин хүчлүүдийг хооронд нь холбосон эмзэг холбоог хурдан устгадаг. Эдгээр холбоо тасрах үед нэгдэл нь биологийн амьдрах чадвараа бүрэн алддаг. Цаашилбал, муу ариутгасан арга нь бактерийн бохирдлыг үүсгэдэг. Бактери нь шингэн орчинд, ялангуяа уургаар баялаг уусмалд үрждэг. Бохирдол нь зөвхөн хадгалах хугацааг алдагдуулаад зогсохгүй дараагийн хэрэглээний аюулгүй байдалд ноцтой эрсдэл учруулдаг. Зөв зохистой харьцах нь эдгээр аюулыг багасгаж, таны хөрөнгө оруулалтыг хамгаална.
Бид амжилттай нөхөн сэргээлтийг гурван өөр шалгуураар хэмждэг. Нэгдүгээрт, эцсийн шийдэл нь бүрэн тодорхой байх ёстой. Үүлэрхэг байдал нь уусаагүй тоосонцор эсвэл химийн урвалыг илтгэнэ. Хоёрдугаарт, та эхнээс нь дуустал хатуу ариутгасан орчинг хадгалах ёстой. Эцэст нь уг процедур нь концентрацийн үнэн зөв харьцааг өгөх ёстой. Хэрэв та уусгагчийн хэмжээг буруу тооцоолсон бол нарийн тунг хийх боломжгүй.
Зөв шингэрүүлэгчийг сонгох нь маш чухал шийдвэр юм. Таны сонгосон уусгагч нь нунтаг хэр сайн уусч, уусмал хэр удаан амьдрах чадвартай болохыг тодорхойлдог. Бактериостатик ус нь ихэвчлэн BAC ус гэгддэг бөгөөд энэ нь үйлдвэрлэлийн стандарт болдог. Энэ нь 0.9% бензилийн спирт агуулдаг. Энэхүү тусгай спиртийн концентраци нь хуруу шилэнд бактерийн өсөлтөөс идэвхтэй сэргийлдэг. Бактерийг дарангуйлснаар BAC ус сэргээсэн уусмалын хадгалах хугацааг 28 хоног хүртэл уртасгадаг. Судлаачид үүнийг найдвартай хадгалдаг тул бараг бүх ерөнхий лабораторийн хэрэглээнд илүүд үздэг.
Тарилгын ариутгасан ус (SWFI) нь өөр хувилбарыг санал болгодог боловч ихээхэн хязгаарлалттай байдаг. BAC уснаас ялгаатай нь SWFI нь ямар ч хадгалах бодис агуулдаггүй. Энэ нь цэвэр, ариутгасан уснаас бүрдэнэ. Бензилийн спирт байхгүй тул та үүнийг нэг удаагийн шингэрүүлэгч болгон ашиглах ёстой. Хэрэв та SWFI-д сэргээсэн шилийг хадгалвал 24 цагийн дотор нянгаар бохирдох онцгой өндөр эрсдэлтэй тулгарна. Та SWFI-г зөвхөн нэг удаагийн хэрэглээнд ашиглах хэрэгтэй.
Өндөр төвөгтэй буюу гидрофобик томъёо нь тусгай уусгагчийг шаарддаг. Гидрофобик гэдэг нь химийн гинж нь усыг идэвхтэй хөдөлгөдөг гэсэн үг юм. Эдгээр тохиолдолд стандарт ус нь нунтаг бялууг уусгахгүй. Лабораторийн техникчид амин хүчлийн тодорхой дарааллыг үнэлж, хамгийн сайн аргыг тодорхойлдог. Тэд ихэвчлэн диметил сульфоксид (DMSO) эсвэл өндөр шингэрүүлсэн цууны хүчил хэрэглэдэг. Эдгээр тусгай уусгагчид нь зөрүүд молекулын саадыг эвддэг. Бага хэмжээний DMSO-д ууссаны дараа та ердийн BAC усыг ашиглан хольцыг шингэлж болно.
Шингэрүүлэгчийн төрөл |
Хамгаалах бодис орсон |
Үндсэн хэрэглээний тохиолдол |
Тооцоолсон хадгалах хугацаа |
|---|---|---|---|
Бактериостатик ус (BAC) |
0.9% бензилийн спирт |
Үйлдвэрлэлийн ерөнхий стандарт |
28 хоног хүртэл |
Ариутгасан ус (SWFI) |
Байхгүй |
Нэг удаагийн хэрэглээний програмууд |
24 цагаас доош |
DMSO / цууны хүчил |
Холимогоос хамаарч өөр өөр байдаг |
Гидрофобик буюу нарийн төвөгтэй гинж |
Хоёрдогч шингэрүүлэлтээс хамаарна |
Та тоног төхөөрөмжийн чанарт буулт хийж чадахгүй. Зөв багаж хэрэгслийг цуглуулах нь гөлгөр, ариутгасан процессыг баталгаажуулдаг. Шилэн савтай харьцахаас өмнө ажлын байраа үргэлж бэлтгэ. Эмх цэгцгүй орон зай нь бохирдох эрсдэлийг нэмэгдүүлдэг. Цэвэр гадаргуу дээр дараах чухал хэрэгслүүд бэлэн байгаа эсэхийг шалгаарай.
Лиофильжүүлсэн пептидийн нэг битүүмжилсэн шил
Таны сонгосон шингэрүүлэгч (ихэвчлэн BAC ус)
Эмнэлгийн чанартай 70% изопропилийн спирттэй арчдас
Ариутгасан Luer-lock холигч тариур (ихэвчлэн 3мл-аас 5мл багтаамжтай)
Стандарт хэмжилтийн тариур (1 мл/100 нэгж)
Ариун цэврийн дэглэмээ гараа сайтар угааж эхэл. Эмнэлзүйн чанартай бээлий өмс. Ариутгагч бодис ашиглан ажлын гадаргууг бүхэлд нь арчина. Дараа нь шингэрүүлэгч болон нунтаг савны хуванцар тагийг гаргаж ав. Шинэхэн архины арчдас авч, хоёр резинэн таглааг сайтар арчина. Согтууруулах ундааг агаарт бүрэн хатаана. Хүний амьсгал тоо томшгүй олон бактер тээдэг тул таглааг нь бүү үлээж бай.
Дамжуулах үе шатанд нарийвчлал нь молекулын гэмтэлээс сэргийлдэг. Та шингэний урсгалыг нарийн хянах хэрэгтэй. Аюулгүй ажиллагааг хангахын тулд дараах дараалсан алхмуудыг дагана уу:
Холигч тариур руугаа гаргаж авахаар төлөвлөж буй шингэрүүлэгчийнхээ хэмжээтэй тэнцэх хэмжээний орчны агаарыг татна.
Шингэрүүлэгчийн шилний таглааг цоолж, доторх агаарыг түлхэнэ. Энэ нь даралтыг тэнцүүлж, шингэнийг татахад хялбар болгодог.
Лонхыг эргүүлж, шингэний яг тооцоолсон хэмжээг тариуртаа хийнэ. Зүүг ав.
Нунтаг савны резинэн таглааг болгоомжтой цоолоно.
Вакуум нөлөөг нэн даруй шийдвэрлэх. Лиофильжүүлсэн олон хуруу шилэнд хүчтэй дотоод вакуум байдаг. Энэхүү вакуум нь таны тариураас шингэнийг байгалийн аргаар татах боломжийг олгоно.
Шингэний урсгалыг шилний дотоод шилэн хананд чиглүүлнэ. Хэзээ ч шингэнийг эмзэг нунтаг бялуу руу шууд буудаж болохгүй.
Шилэн хана руу урсах урсгалыг чиглүүлэх нь хэрэгжүүлэх чухал дүрэм юм. Энэ нь нунтаг нь бие махбодийн хүчтэй гэмтэлээс сэргийлдэг. Уусгагч нь доод хэсэгт хуримтлагдаж, хуурай нэгдлийг зөөлөн шингээнэ.
Татан буулгах үе шатанд эрсдэлийн оргил үеийг зохицуулах. Та шилийг сэгсрэхээс зайлсхийх хэрэгтэй. Сэгсрэх нь хүчтэй зүсэх стрессийг үүсгэдэг. Энэ нь агаарын бөмбөлгийг хольц руу шахаж, амин хүчлийн гинжийг бие махбодийн хувьд салгаж чаддаг. Харин шилийг зөөлөн барина. Алганыхаа завсраар аажуухан өнхрүүлээрэй. Эсвэл маш удаан, тасралтгүй эргүүлэх хөдөлгөөнийг ашиглана.
Хэдэн минутын дараа зөөлөн эргүүлсний дараа харааны шалгалтыг хийнэ үү. Шилэн савыг гэрлийн эх үүсвэр хүртэл барина. Эцсийн шийдэл нь 100% ил тод байх ёстой. Та хөвөгч тоосонцор, үүлэрхэг, желатин бөөгнөрөл харагдах ёсгүй. Хэрэв шингэн нь бүрэн тунгалаг хэвээр байвал нөхөн сэргээх үйл явц амжилттай болсон. Та одоо тодорхой хэмжилтийг тооцоолох руу шилжиж болно.
Концентрацийн тооцоог эзэмшсэнээр тунгийн аюултай алдааг арилгана. Шинээр бэлтгэсэн уусмалын миллилитр тутамд хичнээн идэвхтэй нэгдэл байгааг та ойлгох ёстой. Бид үүнийг шууд үнэлгээний хэмжүүр ашиглан тодорхойлдог. Үндсэн томъёо нь нийт нунтаг массыг уусгагчийн нийт эзэлхүүнд хуваахыг шаарддаг.
Үндсэн томъёо: Пептидийн нийт мг / Нийт мл шингэлэгч = Нэг мл дэх концентраци.
Томьёог хэрэглэхээс өмнө хөрвүүлэх үндсэн шугам хэрэгтэй. Лонхонд агуулагдах хэмжээг миллиграмм (мг) -ээр жагсаав. Тариур нь ихэвчлэн микрограмм (мкг) -ээр тунг хэмждэг. Та эдгээр нэгжийг үнэн зөв хөрвүүлэх ёстой. Бүх нийтийн стандартад 1 миллиграмм нь 1000 микрограммтай тэнцэнэ гэж заасан байдаг. Энэ хөрвүүлэлтийг санах ойд хийснээр лабораторийн хэмжилтийн хамгийн түгээмэл алдаанаас сэргийлнэ.
Практик жишээ хувилбарыг авч үзье. Танд 5 мг лиофильжүүлсэн нунтаг агуулсан шил байна гэж төсөөлөөд үз дээ. Та үүнийг 2 мл BAC ус ашиглан холихоор шийднэ. Үндсэн томъёог хэрэглэвэл: 5мг 2мл-т хуваасан нь 1мл тутамд 2.5мг байна. Дараа нь бид үр дүнг микрограмм болгон хувиргадаг. 2.5 мг-ыг 1000-аар үржүүлээрэй. Та одоо нэг миллилитрт 2500 мкг идэвхтэй бодис агуулагдаж байгааг мэдэж байна.
Дараа нь та энэ концентрацийг тариурын хачигт шилжүүлэх ёстой. Стандарт 1 мл инсулин хэлбэрийн тариур нь 100 нэгж (хачиг) агуулдаг. Нэгж бүр нь 0.01 мл шингэнийг илэрхийлнэ. Хэрэв 1 мл нь 2500 мкг агуулдаг бол бид 2500-г 100 нэгжид хуваана. Энэ нь тариур дээрх хачиг бүрд яг 25 мкг нэгдэл агуулагдаж байна гэсэн үг. Хэрэв таны протокол 250 мкг хэрэглэх шаардлагатай бол та шингэнийг 10 нэгжийн тэмдэг хүртэл татах болно.
Тариурын нэгж (1мл/100U) |
Олж авсан хэмжээ (мл) |
Тун (2мл-д 5мг холино) |
Тун (2 мл-т 10 мг холино) |
|---|---|---|---|
10 нэгж |
0.1 мл |
250 мкг |
500 мкг |
20 нэгж |
0.2 мл |
500 мкг |
1000 мкг |
50 нэгж |
0.5 мл |
1250 мкг |
2500 мкг |
Гарын авлагын математик нь хүний алдаа гаргах зайг үлдээдэг. Бид эдгээр нэгдлүүдэд тусгайлан зориулсан баталгааждаг онлайн тооцоолуур ашиглахыг зөвлөж байна. Шилний хэмжээ, шингэрүүлэгчийн хэмжээ болон хүссэн микрограмм хэмжээг оруулна уу. Хэрэгсэл нь шаардлагатай нэгжийн яг тоог гаргах болно. Гарын авлагын математикийг дахин шалгахын тулд дижитал тооцоолуур ашиглах нь судалгааны протоколд аюулгүй хандах хандлагыг бэхжүүлдэг.
Хүрээлэн буй орчны хүчин зүйлүүд нь хадгалах хугацааг тодорхойлдог. Та бараа материалаа хамгаалахын тулд температурын хатуу протоколуудыг хэрэгжүүлэх ёстой. Сэргээхээс өмнөх хадгалалт нь таны цаг хугацаанаас хамаарна. Хэдэн сарын турш удаан хугацаагаар хадгалахын тулд лиофилжсэн шилийг -20 хэмийн гүн хөлдөөгчид хадгална. Хэдэн долоо хоногоос бага хугацаанд богино хугацаанд хадгалахад 2°С-аас 8°С-ийн температурт стандарт хөргөгч төгс ажилладаг. Гэсэн хэдий ч, нөхөн сэргээлтийн дараах дүрэм бүхэлдээ өөрчлөгддөг. Шингэн нь хуруу шилэнд орсны дараа уусмалыг 2-8 хэмийн температурт хөргөгчинд хадгална. Шингэн уусмалыг хөлдөөж болохгүй.
Гэрэл ба исэлдэлт нь молекулын бүрэн бүтэн байдалд асар их эрсдэл учруулдаг. Хэт ягаан туяа нь фото исэлдэлтийн замаар химийн нарийн төвөгтэй холбоог хурдан задалдаг. Та шилийг үргэлж гэрэлд тэсвэртэй саванд хадгалах хэрэгтэй. Хэрэв танд тусгай зориулалтын сав байхгүй бол хөргөгчийн шүүгээний арын булан шиг харанхуй орчинд хадгалаарай. Шилжүүлэн суулгах явцад өрөөний гэрэлд өртөхийг аль болох хязгаарлаарай.
Хадгалах хугацааны бодит байдлыг ойлгох нь муудсан нэгдлүүдийг санамсаргүйгээр ашиглахаас сэргийлдэг. Эмнэлзүйн нотолгоо нь хугацаа дуусах тодорхой үндэслэлийг өгдөг. Ихэнх BAC ус ашиглан сэргээсэн пептидүүд ойролцоогоор 3-4 долоо хоногийн турш дээд зэргийн тогтвортой байдлыг хадгалж байдаг. 28 дахь өдрийн дараа бензилийн спирт нь хамгаалалтын хүчээ алддаг. Нэгдэл нь өөрөө задарч, үр нөлөөгөө хурдан алддаг. Шилэн савнуудаа үргэлж найруулсан огноог нь бичээрэй. Та огнооноос үл хамааран үүлэрхэг, өнгө алдагдах, хөвөх хэсгүүдийг харуулсан аливаа уусмалыг нэн даруй хаях ёстой.
Амжилттай нөхөн сэргээх нь туйлын үргүйдэл, нарийн математик тооцоолол, онцгой зөөлөн харьцах гэсэн гурван үндсэн тулгуурт тулгуурладаг. Эдгээр хэсгүүдийн аль нэгэнд бүтэлгүйтэх нь нэгдлийн бүтцийн бүрэн бүтэн байдлыг алдагдуулдаг. Вакуум нөлөөг ойлгож, лиофилжсэн нунтагуудын эмзэг байдлыг хүндэтгэснээр та аюулгүй байдал, үр нөлөөг дээд зэргээр нэмэгдүүлэх болно. Шингэрүүлэгчийн сонголт нь урт наслалтад ихээхэн нөлөөлдөг тул BAC усыг лабораторид удаан хугацаагаар хэрэглэхэд маргаангүй стандарт болгодог.
Таны дараагийн алхам бол одоо байгаа лабораторийн хангамжид аудит хийх явдал юм. Хугацаа нь дууссан шингэрүүлэгч эсвэл эргэлзээтэй шилийг устгана уу. Өндөр чанартай, гуравдагч этгээдийн туршсан бактериостатик усыг нэр хүндтэй борлуулагчдаас аваарай. Эцэст нь, шинэ холих протоколуудыг үргэлжлүүлэхийн өмнө үнэн зөв хэмжих хэрэгсэл, тоон тооцоолуур ашиглана уу. Зөв бэлтгэл нь найдвартай, дахин давтагдах үр дүнг баталгаажуулдаг.
Хариулт: Үүлэрхэг байдал нь ихэвчлэн бүрэн уусаагүй, шингэрүүлэгч буруу сонгогдсон эсвэл чанар алдагдаж байгааг илтгэнэ. Гидрофобик бүтэц нь ихэвчлэн стандарт уснаас татгалзаж, сүүтэй болдог. Эсвэл тээвэрлэлтийн явцад температурын огцом хэлбэлзэл нь нунтагыг гэмтээсэн байж магадгүй юм. Хэрэв гучин минутын дараа зөөлөн эргүүлэх нь шингэнийг арилгахгүй бол шилийг бүхэлд нь хая. Үүлэрхэг шийдэл нь урьдчилан таамаглах аргагүй бөгөөд хэрэглэхэд аюултай.
Х: Үгүй. Та шингэн уусмалыг хөлдөөхөөс хатуу зайлсхийх хэрэгтэй. Хөлдөөх-гэсэлтийн мөчлөг нь усны молекулуудыг түрэмгийлэн тэлж, агшихад хүргэдэг. Энэхүү физик тэлэлт нь бичил харуурын мөсөн талстуудыг үүсгэдэг. Эдгээр талстууд нь нарийн амин хүчлийн холбоог тасалж, бүтцийн ноцтой гэмтэл учруулдаг. Бэлтгэсэн шилийг үргэлж 36 ° F-аас 46 ° F-ийн хооронд хөргөгчинд хадгална.
Хариулт: Сэгсрэх нь шилжилтийн хүчтэй стрессийг бий болгож, шилний дотор хурдан хөөс үүсгэдэг. Энэхүү механик гэмтэл нь уургийн холбоог эвдэж, үр нөлөөг нь бүрмөсөн алдахад хүргэдэг. Хэрэв та санамсаргүйгээр сэгсэрвэл савыг хөргөгчинд нэн даруй хийнэ. 24 цагийн турш тайван байлгана. Үнэлгээний явцад боломжит үр ашгийн алдагдлыг анхаарч үзээрэй.
Х: Эмнэлзүйн стандарт удирдамжийн дагуу бактериостатик ус хатгалт хийснээс хойш 28 хоногийн турш аюулгүй хэвээр байна. 0.9% бензилийн спирт нь агаар болон орчны бохирдуулагчид өртөхөд цаг хугацааны явцад мууддаг. Дөрвөн долоо хоногийн дараа энэ нь бактерийн өсөлтөөс урьдчилан сэргийлэх баталгаа болж чадахгүй. 29 дэх өдөр нээгдсэн BAC усыг үргэлж хая.
