|
1 sarja (10 injektiopulloa)
| Määrä: | |
|---|---|
▎ Bronkogeenitutkimus
Molekyylinen tausta
Bronkogeeni on peptidi, josta keskustellaan ei-kliinisissä laboratoriotutkimuksissa; kemiallisesti sanottuna se on polypeptidi, jonka aminohapposekvenssi on Ala-Asp-Glu-Leu – eli tetrapeptidi [1].
Tutkimuksen edistyminen
JR Monaselidze arvioi DNA:n sulamisen termodynaamiset parametrit Bronchogenin läsnä ollessa eri pitoisuuksilla käyttämällä differentiaalista pyyhkäisykalorimetriä. Tässä eristetyssä DNA-kokeessa kirjoittajat raportoivat stabiloivasta vuorovaikutuksesta Bronchogenin kanssa. Tutkijat mittasivat vasikan kateenkorvan ja hiiren maksan DNA:n sulamislämpötilan nousun 3,1 °C kapealla r-alueella (bronkogeenin ja DNA:n välinen moolisuhde 0,01–0,055). R:n lisäntymiseen ei liittynyt muutoksia sulamislämpötilassa. Kompleksinen sulamisentalpia (ΔHmelt) pysyi muuttumattomana tällä alueella r (0,01–1,0). Kateenkorvan ja hiiren maksan DNA:n ΔHmelt oli 11,4 ja 12,7 cal/g, vastaavasti. Tutkimuksen tekijät tulkitsevat nämä tulokset osoittavan, että Bronchogen ei ole adeniini-tymiinispesifinen tai guaniini-sytosiinispesifinen ligandi. Havaittu sitoutuminen luonnehdittiin vahvaksi ja epäspesifiseksi testatuissa olosuhteissa. Kirjoittajat kuvasivat myös sitoutumisen eristetyn DNA:n molempiin juosteisiin (ensisijaisesti typpiemästen kanssa) [1].
Kuva 1. DNA:n sulamislämpötilan riippuvuus r:stä pH:ssa 7,02 [1] .
Pääfraktio (1); vasikan kateenkorvan DNA:n satelliittifraktio (2). Hiiren maksan DNA:n pääosa (hieno piikki) liuoksissa: (3) 0,015 M NaCl, 0,0015 M sitraattipuskuri; (4) 0,15 M NaCl, 0,015 M sitraattipuskuri.
Obstruktiivisen keuhkopatologian ei-kliinisessä rottamallissa pienimolekyylisten peptidien vaikutuksia keuhkoputken epiteelin rakenteeseen, esteisiin liittyviin markkereihin ja tulehdusmittauksiin tutkittiin NA Kuzubova . Krooninen obstruktiivinen keuhkosairaus mallinnettiin rotilla 60 päivän jaksottaisella altistuksella NO2:lle. Tässä rottamallissa yhden kuukauden Bronchogen-altistus liittyi muutoksiin keuhkoputken epiteelin ja keuhkokudoksen uusiutumisominaisuuksissa (pikarisolujen liikakasvu, levyepiterimäinen metaplasia, lymfosyyttinen infiltraatio ja emfyseema sekä väreväristen solujen palautuminen). Tutkijat raportoivat myös muutoksia erittävässä IgA:ssa, paikallisessa immuniteettimarkkerissa ja bronkoalveolaarisessa solukoostumuksessa ja proinflammatorisissa sytokiiniprofiileissa, jotka ovat yhdenmukaisia alhaisemman mitatun neutrofiilisen tulehduksen kanssa tässä rottamallissa [3].
V. Kh. Khavinson mittasi Ki67-, Mcl-1-, p53-, CD79- ja NOS-3-proteiinitasot ihmisalkion bronkoepiteelisoluviljelmien 1., 7. ja 14. siirrostuksessa. NKX2-1:n, SCGB1A1:n, SCGB3A2:n, FOXA1:n, FOXA2:n, MUC4:n, MUC5AC:n ja SFTPA1:n geeniekspressio mitattiin reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla. Käyttämällä spektrofotometriaa, viskometriaa ja ympyrädikroismia tutkimme ADEL-DNA-vuorovaikutusta in vitro. Näissä soluviljelykokeissa kirjoittajat raportoivat, että ADEL liittyi muutoksiin Ki67-, Mcl-1-, p53-, CD79- ja NOS-3-proteiinien tasoissa ihmisen keuhkoputkien epiteelisoluviljelmissä eri siirrostuksissa. Suurimmat raportoidut muutokset Ki67- ja Mcl-1-assosioituneissa proliferaatiomarkkereissa tapahtuivat myöhemmissä kulkuvaiheissa keuhkoputkien epiteelisoluviljelmissä. Tässä in vitro -mallissa ADEL:n raportoitiin muuttavan keuhkoputkien epiteelin erilaistumiseen osallistuvien geenien ilmentymistä: NKX2-1, SCGB1A1, SCGB3A2, FOXA1 ja FOXA2. Tutkijat havaitsivat myös keuhkojen kehitykseen liittyvien geenien muuttuneen ilmentymisen: MUC4, MUC5AC ja SFTPA1. Nämä laboratoriomenetelmät tulkittiin todisteiksi ADEL-DNA-vuorovaikutuksesta, joka sisältää alueen suuressa urassa (N7-guaniini) [4].
Kuva 2. Peptidi ADEL:n vaikutus keuhkoputken epiteelin geeniekspressioon [4] .
*p < 0,05 – verrattuna kontrolliin
ON Titova tutki tetrapeptidibronkogeenin vaikutuksia keuhkoputkien epiteelin rakenteelliseen ja toiminnalliseen tilaan ja keuhkojen tulehdusaktiivisuuteen kroonisen obstruktiivisen keuhkosairauden (COPD) rottamallissa, jonka aiheutti 60 päivän ajoittainen typpidioksidialtistus. Bronkoalveolaarisen huuhtelunesteen (BALF) solukoostumus ja sytokiini-entsyymiprofiili sekä erittävän immunoglobuliini A:n ja surfaktanttiproteiini B:n tasot BALF:ssa määritettiin. Kokeellisen tarkkailujakson aikana kirjoittajat raportoivat alhaisemmista mitatuista neutrofiilisistä tulehduksista ja muutoksista bronkoalveolaarisessa solukoostumuksessa, sytokiineissa ja entsyymeissä hoidetuilla rotilla. Tässä rottamallissa tutkijat kuvasivat myös muutoksia aiemmin häiriintyneessä keuhkoputkien epiteelin rakenteessa ja erittävän immunoglobuliini A:n (paikallinen immuniteettimarkkeri) ja pinta-aktiivisen proteiinin B (liittyy alveolaariseen pintajännitykseen) lisääntymistä [5].
LI Fedorejevan tutkimuksessa havaittiin, että eksogeeniset lyhyet bioaktiiviset peptidit epitalon (Ala-Glu-Asp-Gly), bronkogeeni (Ala-Glu-Asp-Leu) ja vilon (Lys-Glu) pitoisuuksina 10-⁷-10-10 M vaikuttivat merkittävästi tabaus-tobaanaccumin (N) kasvuun, kehitykseen ja erilaistumiseen. Näissä kasviviljelmissä tutkijat havaitsivat lisääntynyttä kalluskasvua ja lehtien muodostumista altistumisen jälkeen epitalonille ja bronogeenille. Tutkimus raportoi muutoksia geenien ilmentymisessä tupakkasoluissa peptidialtistuksen jälkeen, mukaan lukien geenit, jotka ovat vastuussa kudosten muodostumisesta ja solujen erilaistumisesta. Kirjoittajat raportoivat myös CLE-perheen geenien – jotka koodaavat tunnettuja endogeenisiä säätelypeptidejä – sekä KNOX1-geenin (transkriptiotekijägeenin) ja GRF-geenin (kasvusäätelytekijägeenin), jotka koodaavat vastaavia DNA:ta sitovia proteiineja (kuten topoisomeraaseja ja nukleaaseja) erilaista ilmentymistä [6].
Ala-Asp-Glu-Leu-peptidin vaikutusta valkoisen rotan maksan kromatiinin lämpöstabiilisuuteen, jossa H1-histoni- ja ei-histoniproteiinit ovat loppuneet, ovat tutkineet J Monaselidze . Kirjoittajat raportoivat, että 10 nm:n kromatiinifilamenteissa, joissa nukleosomit eivät ole vuorovaikutuksessa, peptidialtistus liittyi muuttuneeseen nukleosomaaliseen ydinrakenteeseen ja noin 15 %:n ydin-DNA:n vapautumiseen, joka sulaa nukleosomaalisen linkkeri-DNA:n sulamislämpötila-alueella. Kirjoittajat ehdottivat, että nämä kromatiinimuutokset voivat lisätä DNA:n transkription saatavuutta koejärjestelmässä [2].
Tutkimuksen rajoitukset
On edelleen epäselvää, onko Bronchogenin sitoutuminen DNA:han sekvenssispesifistä vai rakennespesifistä; toisin sanoen, ei vielä tiedetä, sitoutuuko Bronchogen satunnaisesti DNA:n suureen vai pienempään uraan vai tunnistaako se spesifisesti tietyt promoottori- tai tehostajaalueet. Tämä epäspesifisen sitoutumisen ominaisuus vaikeuttaa geeniekspression havaittujen muutosten (kuten NKX2-1:n ja SCGB1A1:n noususäätelyn) suoraan liittämistä spesifisiin DNA-peptidivuorovaikutuksiin [4] . Nämä tulokset ovat peräisin eristetystä DNA:sta, soluviljelmistä, kasviviljelmistä ja rottamalleista; ne eivät osoita turvallisuutta tai tehoa ihmisillä. Kasviviljelyjulkaisussa [6] kuvataan Ala-Glu-Asp-Leu:ta, joka eroaa jäännösjärjestyksen suhteen edellä mainitusta Ala-Asp-Glu-Leu-sekvenssistä; näiden sekvenssien tuloksia ei pitäisi olettaa keskenään vaihdettavina.
COCER Peptides esittelee Bronchogenin yksinomaan ei-kliiniseen laboratoriotutkimukseen. Sitä ei ole tarkoitettu ihmisten tai eläinlääketieteelliseen käyttöön, antamiseen tai kulutukseen millään tavalla, eikä sitä ole tarkoitettu diagnosointiin, hoitoon, ehkäisyyn tai muuhun kliiniseen käyttöön. Yllä oleva yhteenveto raportoi vain mainituista ei-kliinisistä ja in vitro -tutkimuksista saadut havainnot; se ei vahvista kliinistä turvallisuutta, tehokkuutta tai FDA:n hyväksyntää eikä sisällä käyttöohjeita.
