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1 kits (10 flacons)
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▎ Recherche sur les bronchogènes
Contexte moléculaire
Bronchogen est un peptide discuté dans la recherche non clinique en laboratoire ; chimiquement parlant, c'est un polypeptide avec la séquence d'acides aminés Ala-Asp-Glu-Leu, c'est-à-dire un tétrapeptide [1].
Progrès de la recherche
JR Monaselidze a estimé les paramètres thermodynamiques de la fusion de l'ADN en présence de Bronchogen à diverses concentrations à l'aide d'un calorimètre différentiel à balayage. Dans cette expérience sur ADN isolé, les auteurs ont signalé une interaction stabilisatrice avec Bronchogen. Les enquêteurs ont mesuré une augmentation de la température de fusion de l'ADN du thymus de veau et du foie de souris de 3,1 °C dans une plage étroite de r (rapport molaire du bronchogène à l'ADN, 0,01 à 0,055). Une nouvelle augmentation de r ne s'est pas accompagnée de changements dans la température de fusion. L'enthalpie de fusion complexe (ΔHmelt) est restée inchangée dans cette plage de r (0,01 à 1,0). ΔHmelt pour l'ADN du thymus et du foie de souris était respectivement de 11,4 et 12,7 cal/g. Les auteurs de l’étude ont interprété ces résultats comme indiquant que Bronchogen n’est pas un ligand spécifique à l’adénine-thymine ou à la guanine-cytosine. La liaison observée a été caractérisée comme étant forte et non spécifique dans les conditions testées. Les auteurs ont également décrit la liaison aux deux brins d'ADN isolé (principalement avec des bases azotées) [1].
Fig1. Dépendance de la température de fusion de l'ADN sur r à pH 7,02 [1] .
Fraction majeure (1) ; fraction satellite de l'ADN du thymus de veau (2). Fraction majeure (pic fin) de l'ADN du foie de souris dans les solutions : (3) NaCl 0,015 M, tampon citrate 0,0015 M ; (4) NaCl 0,15 M, tampon citrate 0,015 M.
Dans un modèle non clinique de pathologie pulmonaire obstructive chez le rat, les effets des peptides de faible poids moléculaire sur la structure épithéliale bronchique, les marqueurs liés à la barrière et les mesures inflammatoires ont été étudiés par N.A. Kouzubova . La maladie pulmonaire obstructive chronique a été modélisée chez le rat par une exposition intermittente de 60 jours au NO2. Dans ce modèle de rat, un mois d'exposition au Bronchogen a été associé à des modifications des caractéristiques du remodelage des tissus épithéliaux bronchiques et pulmonaires (hyperplasie des cellules caliciformes, métaplasie squameuse, infiltration lymphocytaire et emphysème, et restauration des cellules ciliées). Les enquêteurs ont également signalé des changements dans les IgA sécrétoires, un marqueur d'immunité local, dans la composition des cellules broncho-alvéolaires et dans les profils de cytokines pro-inflammatoires, cohérents avec une inflammation neutrophile mesurée plus faible dans ce modèle de rat [3].
V. Kh. Khavinson a mesuré les niveaux de protéines Ki67, Mcl-1, p53, CD79 et NOS-3 dans les 1er, 7e et 14e passages de cultures de cellules bronchoépithéliales embryonnaires humaines. L'expression des gènes de NKX2-1, SCGB1A1, SCGB3A2, FOXA1, FOXA2, MUC4, MUC5AC et SFTPA1 a été mesurée par réaction en chaîne par polymérase en temps réel. En utilisant la spectrophotométrie, la viscosimétrie et le dichroïsme circulaire, nous avons étudié l'interaction ADEL-ADN in vitro. Dans ces expériences de culture cellulaire, les auteurs ont rapporté qu'ADEL était associé à des modifications des niveaux de protéines Ki67, Mcl-1, p53, CD79 et NOS-3 dans les cultures de cellules épithéliales bronchiques humaines à divers passages. Les changements les plus importants signalés dans les marqueurs de prolifération associés à Ki67 et Mcl-1 se sont produits dans les cultures de cellules épithéliales bronchiques à passage ultérieur. Dans ce modèle in vitro, ADEL modifierait l'expression de gènes impliqués dans la différenciation épithéliale bronchique : NKX2-1, SCGB1A1, SCGB3A2, FOXA1 et FOXA2. Les enquêteurs ont également observé une expression altérée des gènes évoqués en relation avec le développement pulmonaire : MUC4, MUC5AC et SFTPA1. Ces méthodes de laboratoire ont été interprétées comme une preuve d’une interaction ADEL-ADN impliquant une région du sillon majeur (guanine N7) [4].
Fig2. L'influence du peptide ADEL sur l'expression génique de l'épithélium bronchique [4] .
*p < 0,05 – par rapport au contrôle
ON Titova a étudié les effets du bronchogène tétrapeptide sur l'état structurel et fonctionnel de l'épithélium bronchique et sur l'activité inflammatoire pulmonaire dans un modèle de rat de maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) induite par 60 jours d'exposition intermittente au dioxyde d'azote. La composition cellulaire et le profil cytokine-enzyme du liquide de lavage broncho-alvéolaire (BALF), ainsi que les niveaux d'immunoglobuline sécrétoire A et de protéine tensioactive B dans le BALF, ont été déterminés. Au cours de la période d'observation expérimentale, les auteurs ont signalé une inflammation neutrophile mesurée plus faible et des modifications de la composition cellulaire broncho-alvéolaire, des cytokines et des enzymes chez les rats traités. Dans ce modèle de rat, les enquêteurs ont également décrit des changements dans la structure épithéliale bronchique précédemment perturbée et des augmentations de l'immunoglobuline sécrétoire A (un marqueur d'immunité local) et de la protéine tensioactive B (liée à la tension superficielle alvéolaire) [5].
Les recherches menées par LI Fedoreyeva ont révélé que les peptides bioactifs courts exogènes épitalon (Ala-Glu-Asp-Gly), bronchogène (Ala-Glu-Asp-Leu) et vilon (Lys-Glu), à des concentrations de 10⁻⁷–10⁻⁹ M, affectaient de manière significative la croissance, le développement et la différenciation des cultures de cals du tabac (Nicotiana tabacum). Dans ces cultures végétales, les chercheurs ont observé une croissance accrue des cals et la formation de feuilles suite à une exposition à l’épitalon et au bronchogène. L'étude a rapporté des changements dans l'expression des gènes dans les cellules du tabac suite à une exposition aux peptides, y compris les gènes responsables de la formation des tissus et de la différenciation cellulaire. Les auteurs ont également rapporté l’expression différentielle des gènes de la famille CLE – qui codent pour des peptides régulateurs endogènes connus – ainsi que du gène KNOX1 (un gène de facteur de transcription) et du gène GRF (un gène de facteur de régulation de la croissance), qui codent pour les protéines de liaison à l’ADN correspondantes (telles que les topoisomérases et les nucléases) [6].
L'influence du peptide Ala-Asp-Glu-Leu sur la thermostabilité de la chromatine hépatique du rat blanc, dans laquelle les histones H1 et les protéines non histones sont épuisées, a été étudiée par J Monaselidzé . Les auteurs ont rapporté que dans les filaments de chromatine de 10 nm, dans lesquels les nucléosomes n'interagissent pas, l'exposition aux peptides était associée à une altération de la structure du noyau nucléosomal et à la libération d'environ 15 % de l'ADN central qui fond dans la plage de température de fusion de l'ADN de liaison internucléosomique. Les auteurs ont suggéré que ces changements dans la chromatine pourraient augmenter l'accessibilité de l'ADN pour la transcription dans le système expérimental [2].
Limites de la recherche
On ne sait toujours pas si la liaison du Bronchogen à l’ADN est spécifique à une séquence ou spécifique à une structure ; en d’autres termes, on ne sait pas encore si Bronchogen se lie de manière aléatoire au sillon majeur ou mineur de l’ADN ou s’il reconnaît spécifiquement certaines régions promotrices ou amplificatrices. Cette caractéristique de liaison non spécifique rend difficile l'attribution directe des changements observés dans l'expression des gènes (tels que la régulation positive de NKX2-1 et SCGB1A1) à des interactions spécifiques ADN-peptide [4] . Ces résultats proviennent d'ADN isolé, de cultures cellulaires, de cultures végétales et de modèles de rats ; ils n’établissent pas l’innocuité ou l’efficacité chez l’homme. La publication sur la culture végétale [6] décrit Ala-Glu-Asp-Leu, qui diffère par l'ordre des résidus de la séquence Ala-Asp-Glu-Leu indiquée ci-dessus ; les résultats de ces séquences ne doivent pas être supposés interchangeables.
COCER Peptides présente Bronchogen uniquement pour la recherche en laboratoire non clinique. Il n'est pas destiné à un usage humain ou vétérinaire, à une administration ou à une consommation par quelque voie que ce soit, et n'est pas destiné au diagnostic, au traitement, à la prévention ou à toute autre utilisation clinique. Le résumé ci-dessus rend compte uniquement des résultats des études non cliniques et in vitro citées ; il n'établit pas la sécurité clinique, l'efficacité ou l'approbation de la FDA et ne fournit aucune instruction d'utilisation.
