कोसर पेप्टाइड्स द्वारा ।         26 दिन पहले

अमूर्त

एक मात्रात्मक पेप्टाइड परिणाम के लिए एक परिभाषित रासायनिक प्रजाति, एक उपयुक्त अंशांकन आधार और सबूत की आवश्यकता होती है कि नमूना हैंडलिंग मापी जा रही मात्रा को संरक्षित करती है। पाउडर द्रव्यमान, क्रोमैटोग्राफ़िक क्षेत्र प्रतिशत और लक्ष्य पेप्टाइड सांद्रता विभिन्न गुणों का वर्णन करते हैं। उन्हें विनिमेय मानने से पहला माप करने से पहले त्रुटि हो सकती है। यह लेख पेप्टाइड मात्रा निर्धारण के दृष्टिकोण के रूप में अमीनो एसिड विश्लेषण, पराबैंगनी अवशोषण, कैलिब्रेटेड तरल क्रोमैटोग्राफी, आइसोटोप कमजोर पड़ने वाले द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री और मात्रात्मक परमाणु चुंबकीय अनुनाद की जांच करता है। यह प्रत्येक विधि द्वारा प्रदान की जाने वाली जानकारी, उसके सिग्नल को एक मात्रा में परिवर्तित करने के लिए आवश्यक मान्यताओं और व्याख्या योग्य परिणाम के लिए आवश्यक नियंत्रणों की व्याख्या करता है। चर्चा प्रयोगशाला सामग्री और विश्लेषणात्मक समाधानों से संबंधित है। यह सार्वभौमिक परिचालन स्थितियों या स्वीकृति सीमाओं को निर्धारित किए बिना, माप प्रक्रिया के चयन और मूल्यांकन के लिए एक रूपरेखा प्रदान करता है।

मापी जाने वाली मात्रा को परिभाषित करें

किसी उपकरण का चयन करने से पहले मापक निर्दिष्ट करें, जिसका अर्थ है मापी जाने वाली इच्छित मात्रा। उदाहरणों में एक एलिकोट में अक्षुण्ण पेप्टाइड की मात्रा, तैयार घोल में इसकी द्रव्यमान सांद्रता, या प्राप्त ठोस नमूने में इसका द्रव्यमान अंश शामिल है। अनुक्रम, टर्मिनल समूह और प्रासंगिक संशोधनों की पहचान करें। बताएं कि क्या रिपोर्ट किए गए द्रव्यमान में काउंटर्स शामिल हैं या केवल पेप्टाइड की मात्रा का वर्णन करता है। परिणाम के लिए एक परिभाषित नमूना सीमा की भी आवश्यकता होती है: विघटित भाग, पूरी तैयारी या एक निर्दिष्ट ऑपरेशन के बाद बरामद सामग्री।

एक तौले गए ठोस में पानी, काउंटर, अवशिष्ट सॉल्वैंट्स और अन्य घटक हो सकते हैं। एक पराबैंगनी क्रोमैटोग्राम में एक बड़ा लक्ष्य शिखर इन सभी घटकों को नहीं मापता है। वांग और सहकर्मियों ने एक द्रव्यमान-संतुलन दृष्टिकोण का प्रदर्शन किया जो एक सिंथेटिक पेप्टाइड सामग्री को चिह्नित करने के लिए कई अशुद्धता वर्गों के माप को जोड़ता है। यह दर्शाता है कि मात्रात्मक मानक तैयार करते समय क्रोमैटोग्राफिक क्षेत्र प्रतिशत को पेप्टाइड द्रव्यमान अंश के लिए स्वचालित रूप से प्रतिस्थापित क्यों नहीं किया जा सकता है। [1]

अंशांकन आधार स्थापित करें

एक अंशशोधक को माप के लिए उपयुक्त एक निर्धारित मात्रा की आवश्यकता होती है, साथ ही इसकी अनिश्चितता और उन शर्तों की भी आवश्यकता होती है जिनके तहत वह असाइनमेंट लागू होता है। सटीक लॉट, रासायनिक रूप, मूल्य आधार और हैंडलिंग निर्देशों के लिए प्रमाणपत्र की जाँच करें। अकेले क्रोमैटोग्राफ़िक शुद्धता बताने वाला लेबल लक्ष्य एकाग्रता की आपूर्ति नहीं करता है। बंक और लोवेन्थल पेप्टाइड और प्रोटीन संदर्भ सामग्री के लिए एकाग्रता असाइनमेंट का समर्थन करने के लिए एनआईएसटी में आइसोटोप कमजोर पड़ने वाले अमीनो एसिड विश्लेषण के उपयोग का वर्णन करते हैं। इस तरह के असाइनमेंट के लिए नाममात्र पाउडर वजन के बजाय एक दस्तावेजी माप प्रक्रिया की आवश्यकता होती है। [2]

एक स्थापित लक्ष्य द्रव्यमान अंश वाली सामग्री से मात्रात्मक रूप से तैयार किए गए समाधान के लिए, द्रव्यमान एकाग्रता है:

ρ = एम × डब्ल्यू / वी

यहां, m तोली गई सामग्री का द्रव्यमान है, w उसी आधार पर इसका लक्ष्य पेप्टाइड द्रव्यमान अंश है, और V अंतिम समाधान मात्रा है। यदि m मिलीग्राम में है, w मिलीग्राम प्रति मिलीग्राम में है और V मिलीलीटर में है, तो ρ प्रति मिलीग्राम मिलीग्राम में है। गणना पूर्ण विघटन और स्थानांतरण मानती है। यह उन परिचालनों को सत्यापित नहीं करता है. मात्रा सांद्रता में रूपांतरण के लिए स्पष्ट रूप से परिभाषित रासायनिक प्रजातियों के दाढ़ द्रव्यमान की आवश्यकता होती है।

जब संभव हो तो एक स्वतंत्र जांच समाधान तैयार करें। गलत तरीके से निर्दिष्ट स्टॉक से प्राप्त अंशांकन मानक और चेक समान त्रुटि रखते हुए एक दूसरे से सहमत हो सकते हैं। स्टॉक की तैयारी और तनुकरण रिकॉर्ड को सुरक्षित रखें ताकि प्रत्येक निर्दिष्ट सांद्रता के स्रोत का पुनर्निर्माण किया जा सके।

पर्याप्त रासायनिक चयनात्मकता वाली विधि चुनें

प्रयोग के लिए आवश्यक नमूना संरचना, अपेक्षित एकाग्रता और अनिश्चितता के अनुसार विधि का चयन करें। एक अपेक्षाकृत शुद्ध संदर्भ सामग्री और कई संबंधित पेप्टाइड्स वाला मिश्रण विभिन्न माप समस्याएं प्रस्तुत करता है। तालिका 1 नीचे चर्चा किए गए प्रमुख विकल्पों की तुलना करती है। सीमित प्रश्न यह है कि क्या मापी गई प्रतिक्रिया को पर्याप्त आत्मविश्वास के साथ परिभाषित लक्ष्य के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।

तालिका 1 माप विकल्प और उनकी प्रमुख सीमाएँ

अमीनो एसिड माप को पेप्टाइड मात्रा से संबंधित करें

अमीनो एसिड विश्लेषण सबसे पहले पेप्टाइड को मापने योग्य घटक अमीनो एसिड में परिवर्तित करता है। होने वाले अवशेषों के लिए , एक देखी गई मात्रा ν _{i बार} अनुक्रम में n _{i एक पेप्टाइड मात्रा} के अनुरूप होगी n _i / ν _i यदि रिहाई पूरी हो गई थी और किसी अन्य स्रोत ने उस अमीनो एसिड का योगदान नहीं दिया था। जहां अनुक्रम अनुमति देता है वहां कई उपयुक्त अवशेषों से अनुमानों की तुलना करें। असहमति एक समस्या को उजागर कर सकती है जिसे औसत अन्यथा छिपा देगा।

हाइड्रोलिसिस को मापे गए अमीनो एसिड के अस्वीकार्य नुकसान या रूपांतरण के बिना चयनित अवशेषों को जारी करना चाहिए। बंक और लोवेन्थल इस बात पर जोर देते हैं कि इन स्थितियों के लिए प्रत्येक विश्लेषण के लिए सत्यापन की आवश्यकता होती है। आइसोटोप कमजोर पड़ने से प्रोटीन कैलिब्रेंट्स की मात्रा निर्धारित करते समय मुनोज़ और सहकर्मियों ने कई अमीनो एसिड का मूल्यांकन किया, हाइड्रोलिसिस का आकलन करने के लिए अवशेष-आधारित अनुमानों के बीच समझौते का उपयोग करने का एक प्रयोगात्मक उदाहरण प्रदान किया। एक सामग्री के लिए स्थापित शर्तों को एक अलग पेप्टाइड के लिए पर्याप्त नहीं माना जाना चाहिए। [2,3]

मुक्त अमीनो एसिड और अन्य पेप्टाइड्स हाइड्रोलाइज़ेट में योगदान कर सकते हैं। नतीजतन, अमीनो एसिड विश्लेषण अकेले इच्छित अक्षुण्ण अनुक्रम को चुनिंदा मात्रा में निर्धारित किए बिना कुल संरचना-संबंधित सामग्री स्थापित कर सकता है। उपयुक्त हाइड्रोलिसिस रिक्त स्थान शामिल करें और लक्ष्य मान निर्दिष्ट करने से पहले इन योगदानों की जांच करें। अंशशोधक मात्रा की गणना करते समय मुक्त अमीनो एसिड की रासायनिक पहचान और रूप का उपयोग करें। उदाहरण के लिए, पबकेम ग्लाइसिन की पहचान CID 750 के रूप में करता है; डेटाबेस रिकॉर्ड पहचान जांच का समर्थन करता है लेकिन अमीनो एसिड संदर्भ सामग्री की सामग्री को प्रमाणित नहीं करता है। [4]

अनुक्रम के माध्यम से पराबैंगनी माप की व्याख्या करें

उपयुक्त वाद्य सीमा के भीतर एक सजातीय समाधान के लिए, बीयर-लैम्बर्ट संबंध ए = εlc रिक्त-सही अवशोषण ए को दाढ़ अवशोषण क्षमता ε, ऑप्टिकल पथ लंबाई एल और मात्रा एकाग्रता सी के साथ जोड़ता है। अवशोषण को पेप्टाइड, तरंग दैर्ध्य और माप स्थितियों के अनुरूप होना चाहिए। 280 एनएम के करीब अवशोषण सुगंधित अवशेषों पर दृढ़ता से निर्भर करता है और प्रत्येक पेप्टाइड के लिए सामान्य एकाग्रता माप के रूप में काम नहीं कर सकता है। एंथिस और क्लोर ने 205 एनएम पर एक अनुक्रम-आधारित दृष्टिकोण विकसित किया, जो एकल रूपांतरण कारक को लागू करने के बजाय संरचना के लिए लेखांकन के मूल्य को दर्शाता है। [5]

छोटी तरंग दैर्ध्य पर, विलायक और बफर अवशोषण सीमित हो सकता है। संरचना-मिलान वाले रिक्त स्थान का उपयोग करें, प्रयोग करने योग्य ऑप्टिकल रेंज की जांच करें, और उपयुक्त तनुकरणों की तुलना करें। मैलापन या अवशोषित अशुद्धता लक्ष्य से असंबंधित एक स्पष्ट एकाग्रता परिवर्तन उत्पन्न कर सकती है। इसलिए प्रत्यक्ष अवशोषण परिणाम में नमूना संरचना के बारे में धारणाएं होनी चाहिए जिस पर यह निर्भर करता है।

क्रोमैटोग्राफ़िक पृथक्करण यूवी माप से पहले चयनात्मकता में सुधार कर सकता है, लेकिन मात्रात्मक एलसी परख के लिए अभी भी एक उचित प्रतिक्रिया संबंध की आवश्यकता होती है। कुइपर्स और ग्रुपेन ने 214 एनएम पर अवशोषण के लिए अमीनो एसिड और पेप्टाइड बॉन्ड के अलग-अलग योगदान को मापा। उनके निष्कर्ष बताते हैं कि विभिन्न पेप्टाइड्स से समान शिखर क्षेत्रों को समान मात्रा का प्रतिनिधित्व करने की आवश्यकता क्यों नहीं है। लक्ष्य परिमाणीकरण के लिए, उपयुक्त निर्दिष्ट मानकों के साथ हल किए गए लक्ष्य प्रतिक्रिया की तुलना करें और वास्तविक विश्लेषणात्मक स्थितियों के तहत अंशांकन को सत्यापित करें। [6]

आइसोटोप तनुकरण एलसी-एमएस में आंतरिक मानक का आकलन करें

आइसोटोप कमजोर पड़ने वाले एलसी-एमएस में, लक्ष्य की प्रतिक्रिया की तुलना एक परिभाषित अंशांकन मॉडल के माध्यम से एक अतिरिक्त आइसोटोपिक रूप से लेबल किए गए समकक्ष के साथ की जाती है। उस मानक की पहचान, निर्दिष्ट मात्रा और समस्थानिक संरचना की पुष्टि करें। क्रोमैटोग्राफ़िक पत्राचार, प्रासंगिक आयन चैनल और लक्ष्य चैनल में बिना लेबल वाली सामग्री के संभावित योगदान की जांच करें। स्टोयानोव और सहकर्मियों ने बताया कि कैसे पेप्टाइड आंतरिक मानकों में बेहिसाब विविधता परिणामी लक्ष्य एकाग्रता को पूर्वाग्रहित कर सकती है। केवल लेबलिंग से कोई विश्वसनीय मात्रात्मक संदर्भ स्थापित नहीं होता है। [7]

आंतरिक मानक को उस नुकसान के उपयुक्त स्तर पर जोड़ें जिसे ट्रैक करना है, और स्थापित करें कि यह विश्लेषणकर्ता की तरह पर्याप्त रूप से व्यवहार करता है। किसी निष्कर्षण के बाद पेश किया गया मानक उस निष्कर्षण के दौरान होने वाले नुकसान को ठीक नहीं कर सकता है। यहां तक ​​कि प्रारंभिक जोड़ के लिए पर्याप्त मिश्रण और तुलनीय व्यवहार की आवश्यकता होती है। पूर्ण प्रतिक्रियाओं और उनके अनुपात दोनों को बनाए रखें: एक स्थिर अनुपात संवेदनशीलता या नमूना प्रबंधन में बड़े बदलावों को छुपा सकता है जो जांच के लायक हैं।

उन संक्रमणों या निकाले गए-आयन संकेतों का चयन करें जो नमूना मैट्रिक्स में लक्ष्य के लिए स्पष्ट रूप से उपयुक्त हैं। एक मिलान द्रव्यमान-से-आवेश मान, अपने आप में, इस बात का प्रमाण नहीं है कि एक हस्तक्षेप करने वाला घटक अनुपस्थित है। एक अक्षुण्ण पेप्टाइड परिणाम को भी पाचन और पुनर्प्राप्ति संबंधों को अलग से स्थापित किए बिना मूल प्रोटीन एकाग्रता में परिवर्तित नहीं किया जाना चाहिए।

निर्दिष्ट संकेतों और संदर्भों के साथ मात्रात्मक एनएमआर का उपयोग करें

मात्रात्मक प्रोटॉन एनएमआर एक निर्दिष्ट अनुनाद के एकीकृत संकेत को योगदान करने वाले नाभिक की संख्या और एक मात्रात्मक संदर्भ से जोड़ता है। आंतरिक-संदर्भ प्रयोग के लिए, राशि संबंध को इस प्रकार व्यक्त किया जा सकता है:

एन _एक्स = एन _आर × ( आई _एक्स / एन _एक्स ) / ( आई _आर / एन _आर )

सबस्क्रिप्ट x और r विश्लेषण और संदर्भ को दर्शाते हैं। I एकीकृत सिग्नल है और N उस सिग्नल द्वारा दर्शाए गए प्रोटॉन की संख्या है; n _r संदर्भ की निर्दिष्ट मात्रा है। अभिव्यक्ति मात्रात्मक रूप से तुलनीय सिग्नल प्रतिक्रिया और सही शिखर असाइनमेंट मानती है। परिणाम को पेप्टाइड द्रव्यमान में परिवर्तित करने के लिए बताई गई रिपोर्टिंग के आधार पर दाढ़ द्रव्यमान की आवश्यकता होती है।

ली और सहकर्मियों ने पेप्टाइड संदर्भ सामग्री के एक सहयोगात्मक अध्ययन में क्यूएनएमआर, अमीनो एसिड विश्लेषण और कैलिब्रेटेड एचपीएलसी की तुलना की। कार्य ने qNMR के व्यावहारिक उपयोग को प्रदर्शित किया और यह भी दिखाया कि विधि की तुलना इस बात पर निर्भर करती है कि मानकों और अनिश्चितताओं का इलाज कैसे किया जाता है। इसके निष्कर्ष सभी पेप्टाइड नमूनों के लिए एक सार्वभौमिक रैंकिंग स्थापित नहीं करते हैं। [8]

अशुद्धियों, विलायक और एक दूसरे से चुने गए विश्लेषण और संदर्भ संकेतों को हल करें। उपयुक्त पल्स और विश्राम की स्थिति, सिग्नल-टू-शोर और एकीकरण सीमाएँ स्थापित करें। बीआईपीएम मार्गदर्शन बताता है कि वास्तविक मिश्रण में संकेतों के लिए छूट का आकलन क्यों किया जाना चाहिए। एक रासायनिक-शिफ्ट संदर्भ स्वचालित रूप से एक मात्रात्मक मानक नहीं है। एकीकृत अनुनाद को साझा करने वाली निकट संबंधी अशुद्धियाँ मापी गई मात्रा में योगदान कर सकती हैं, भले ही अभिन्न अत्यधिक दोहराव योग्य हो। [9]

8 अंशांकन रेंज प्रदर्शित करें

अंशांकन स्तर तैयार करें जो इच्छित नमूना प्रतिक्रिया को कवर करता है और चुने गए प्रतिक्रिया मॉडल का आकलन करता है। अवशेषों और वक्र से गणना की गई सांद्रता की जांच करें। निर्धारण का एक उच्च गुणांक, R², स्वयं स्वीकार्य अंशांकन स्थापित नहीं कर सकता है, विशेष रूप से सीमा के निचले सिरे के पास। यूराकेम प्रतिगमन व्यवहार का मूल्यांकन करने और भारोत्तोलन पर विचार करने की सिफारिश करता है जहां प्रतिक्रिया भिन्नता एकाग्रता के साथ बदलती है। प्लॉट की गई रेखा की उपस्थिति के बजाय प्रयोगात्मक साक्ष्य का उपयोग करके मॉडल चुनें। [10]

सीमा के भीतर प्रदर्शन का आकलन करने के लिए स्वतंत्र रूप से तैयार नियंत्रणों का उपयोग करें। न्यूनतम सांद्रता स्थापित करें जिस पर आवश्यक सटीकता और पूर्वाग्रह का समर्थन किया जा सके; अकेले सिग्नल का पता लगाना अपर्याप्त है। तनुकरण की आवश्यकता वाले नमूनों के लिए, प्रदर्शित करें कि तनुकरण एक वैध परिणाम को सुरक्षित रखता है। नमूना अनुक्रम का मूल्यांकन करने से पहले स्वीकृति मानदंड रिकॉर्ड करें और किसी भी बहिष्कृत अंशांकन बिंदु का कारण बनाए रखें। किसी असंबंधित परख से संख्यात्मक सीमाएं आयात किए बिना, विश्लेषणात्मक उद्देश्य के अनुकूल मानदंड लागू करें।

मैट्रिक्स प्रभावों से हैंडलिंग हानियों को अलग करें

माप के लिए उपयोग की जाने वाली सांद्रता पर विघटन, स्थानांतरण और धारण अवधि का मूल्यांकन करें। गोएबेल-स्टेंगेल और सहकर्मियों ने प्रदर्शित किया कि पेप्टाइड पुनर्प्राप्ति संपर्क सतह पर निर्भर हो सकती है। स्वतंत्र नमूना तैयारियाँ इस योगदान को प्रकट करने में मदद करती हैं, जबकि एक ही शीशी से बार-बार किए गए उपकरण माप पहले की तैयारी के नुकसान को पुन: उत्पन्न नहीं कर सकते हैं। उपयुक्त ताजा और रखे हुए एलिकोट्स की तुलना करें और किसी भी निस्पंदन या सफाई के बाद पुनर्प्राप्ति की जांच करें। [11]

एलसी-एमएस के लिए, प्रतिक्रिया में परिवर्तन नमूना घटकों के सहवास के कारण होने वाले आयनीकरण में परिवर्तन को प्रतिबिंबित कर सकता है। माटुस्ज़ेव्स्की और सहकर्मियों ने ऐसे प्रयोगों का वर्णन किया जो मैट्रिक्स प्रभावों को निष्कर्षण पुनर्प्राप्ति से अलग करते हैं। पेप्टाइड विधि पर लागू, स्वच्छ मानकों के बीच तुलना, निष्कर्षण के बाद मजबूत किए गए खाली अर्क और निष्कर्षण से पहले मजबूत किए गए नमूने इन प्रभावों को अलग करने में मदद कर सकते हैं, बशर्ते कि सांद्रता, मात्रा और अंतर्जात योगदान को लगातार नियंत्रित किया जाता है। आंतरिक-मानक-सामान्यीकृत प्रतिक्रिया के साथ-साथ व्यक्तिगत संकेतों का मूल्यांकन करें। [12]

विशिष्ट प्रश्नों के उत्तर देने वाले रिक्त स्थान शामिल करें। एक अभिकर्मक रिक्त जांच की गई पृष्ठभूमि; एक संकेंद्रित नमूने के कैरीओवर की जांच के बाद एक रिक्त स्थान। जहां वास्तव में रिक्त नमूना मैट्रिक्स उपलब्ध नहीं है, वहां वैकल्पिक डिज़ाइन और उसकी सीमाओं का दस्तावेजीकरण करें। एक स्पाइक प्रयोग परीक्षण की गई स्थितियों के तहत अतिरिक्त सामग्री की पुनर्प्राप्ति का आकलन करता है; यह साबित नहीं करता है कि मूल रूप से मौजूद विश्लेषण पूरी तरह से पुनर्प्राप्त या हस्तक्षेप से मुक्त था।

परिणाम को उसकी अनिश्चितता और दायरे के साथ रिपोर्ट करें

अनिश्चितता मूल्यांकन को माप मॉडल का पालन करना चाहिए और इसमें प्रभावशाली योगदान शामिल होना चाहिए। ये अंशशोधक मूल्य असाइनमेंट, वजन और कमजोर पड़ने, तैयारी पुनर्प्राप्ति, अंशांकन और दोहराव से उत्पन्न हो सकते हैं। जहां प्रासंगिक हो वहां साझा इनपुट और सहसंबंधों का ध्यान रखें। माप में अनिश्चितता की अभिव्यक्ति के लिए जेसीजीएम गाइड ऐसी जानकारी के संयोजन और परिणाम की रिपोर्ट करने के लिए रूपरेखा प्रदान करता है। दोहराए गए मापों से एक छोटा मानक विचलन केवल उन मापों द्वारा दर्शाई गई भिन्नता का वर्णन करता है। [13]

नमूना और बैच पहचानकर्ताओं, परिभाषित पेप्टाइड प्रजातियों, मापी गई मात्रा, इकाई, विधि संस्करण और अंशांकन आधार की रिपोर्ट करें। स्वतंत्र तैयारियों की संख्या और प्रकार बताएं और किसी भी कमजोर पड़ने या पुनर्प्राप्ति सुधार को कैसे लागू किया गया। यदि विस्तारित अनिश्चितता की सूचना दी जाती है, तो कवरेज कारक और मूल्यांकन द्वारा उचित व्याख्या की पहचान करें। अंतर्निहित क्रोमैटोग्राम या स्पेक्ट्रा, एकीकरण निर्णय और नियंत्रण परिणाम सुरक्षित रखें।

जब विधियां असहमत हों, तो पहले उनकी रासायनिक चयनात्मकता और रिपोर्टिंग आधारों की तुलना करें। एक हाइड्रोलाइज़ेट-आधारित अनुमान, एक समाधानित अक्षुण्ण-पेप्टाइड परख और एक पाउडर द्रव्यमान विभिन्न मात्राओं को संदर्भित कर सकता है। उपकरण के प्रदर्शन पर असहमति का आरोप लगाने से पहले उस अंतर को हल करें। उपयोगी परिणाम एक परिभाषित नमूने से जुड़ी मात्रा है और एक ट्रेस करने योग्य प्रयोगात्मक रिकॉर्ड द्वारा समर्थित है।

अनुसंधान का दायरा. यह लेख प्रयोगशाला नमूनों में पेप्टाइड सामग्री के विश्लेषणात्मक मात्रा निर्धारण से संबंधित है। यह मानव या पशु चिकित्सा उपयोग के लिए कोई निर्देश नहीं देता है और जैविक प्रभावकारिता, नैदानिक ​​​​उपयुक्तता या नियामक अनुमोदन के बारे में कोई दावा नहीं करता है। प्रत्येक माप प्रक्रिया के लिए इच्छित नमूने और प्रयोगशाला उद्देश्य के लिए मूल्यांकन की आवश्यकता होती है।

संदर्भ

[1] वांग एक्स, झांग एफ, ली एच, एट अल। द्रव्यमान संतुलन दृष्टिकोण का उपयोग करके सिंथेटिक ग्लूकागन की शुद्धता का निर्धारण। वैज्ञानिक रिपोर्ट. 2020;10:4423. डीओआई: 10.1038/एस41598-020-61109-9

[2] बंक डीएम, लोवेन्थल एमएस। मात्रात्मक अमीनो एसिड विश्लेषण के लिए आइसोटोप कमजोर पड़ने वाले तरल क्रोमैटोग्राफी-टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री। इन: अमीनो एसिड विश्लेषण: तरीके और प्रोटोकॉल। दूसरा संस्करण. आण्विक जीवविज्ञान में विधियाँ। 2019;2030. अध्याय 12. डीओआई: 10.1007/978-1-4939-9639-1_12

[3] मुनोज़ ए, क्राल आर, शिममेल एच। आइसोटोप कमजोर पड़ने वाले द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग करके अमीनो एसिड विश्लेषण द्वारा प्रोटीन अंशांकन की मात्रा। विश्लेषणात्मक जैव रसायन. 2011;408(1):124-131। doi: 10.1016/j.ab.2010.08.037

[4] राष्ट्रीय जैव प्रौद्योगिकी सूचना केंद्र। सीआईडी ​​750, ग्लाइसीन के लिए पबकेम कंपाउंड सारांश। 2 नवंबर 2026 को एक्सेस किया गया। स्रोत दस्तावेज़

[5] एंथिस एनजे, क्लोर जीएम। 205 एनएम पर अवशोषण द्वारा प्रोटीन और पेप्टाइड सांद्रता का अनुक्रम-विशिष्ट निर्धारण। प्रोटीन विज्ञान. 2013;22(6):851-858। डीओआई: 10.1002/प्रो.2253

[6] कुइपर्स बीजेएच, ग्रुपेन एच। मात्रात्मक रिवर्स चरण उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण को सक्षम करने के लिए 214 एनएम पर घटक अमीनो एसिड के यूवी अवशोषण का उपयोग करके प्रोटीन और पेप्टाइड्स के दाढ़ विलुप्त होने के गुणांक की भविष्यवाणी। कृषि और खाद्य रसायन पत्रिका। 2007;55(14):5445-5451। डीओआई: 10.1021/जेएफ070337एल

[7] स्टॉयनोव एवी, रोगात्स्की ई, स्टीन डी, एट अल। पेप्टाइड परिमाणीकरण में आइसोटोप तनुकरण परख: आंतरिक मानक की सूक्ष्म विषमता की चुनौती। प्रोटिओमिक्स क्लिनिकल अनुप्रयोग. 2013;7(11-12):825-828। डीओआई: 10.1002/पीआरसीए.201200130

[8] ली सी, भावराजू एस, मेलानसन जेई, एट अल। पेप्टाइड मात्रा निर्धारण विधियों का सर्वेक्षण और उनकी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता की तुलना: ऑक्सीटोसिन का उपयोग करके एक केस अध्ययन। फार्मास्युटिकल और बायोमेडिकल विश्लेषण जर्नल. 2019;166:105-112। doi: 10.1016/j.jpba.2018.12.028

[9] वेस्टवुड एस, स्टॉपपैचर एन, मार्टोस जी, एट अल। क्यूएनएमआर के लिए आंतरिक मानक संदर्भ डेटा: 3,5-बीआईएस (ट्राइफ्लोरोमिथाइल) बेंजोइक एसिड। तालमेल बीआईपीएम-2019/02, आईएसआरडी-05। संस्करण 1.0; 13 मार्च 2019. धारा 3. स्रोत दस्तावेज़

[10] केंटवेल एच, एड। विश्लेषणात्मक तरीकों के उद्देश्य के लिए उपयुक्तता: विधि सत्यापन और संबंधित विषयों के लिए एक प्रयोगशाला गाइड। तीसरा संस्करण. यूराकेम; 2025. धारा 5.2-5.4। स्रोत दस्तावेज़

[11] गोएबेल-स्टेंगल एम, स्टेंगल ए, टैचे वाई, रीव जेआर जूनियर। पेप्टाइड्स से जुड़े अध्ययनों में इष्टतम प्लास्टिकवेयर और कांच के बर्तनों का उपयोग करने का महत्व। विश्लेषणात्मक जैव रसायन. 2011;414(1):38-46। doi: 10.1016/j.ab.2011.02.009

[12] माटुस्ज़ेव्स्की बीके, कॉन्स्टैनज़र एमएल, चावेज़-इंग्लैंड सीएम। एचपीएलसी-एमएस/एमएस पर आधारित मात्रात्मक जैवविश्लेषणात्मक तरीकों में मैट्रिक्स प्रभाव के आकलन के लिए रणनीतियाँ। विश्लेषणात्मक रसायनशास्त्र। 2003;75(13):3019–3030। डीओआई: 10.1021/एसी020361एस

[13] मेट्रोलॉजी में गाइड के लिए संयुक्त समिति। माप डेटा का मूल्यांकन: माप में अनिश्चितता की अभिव्यक्ति के लिए मार्गदर्शिका। जेसीजीएम 100:2008। संशोधित संस्करण 2010। धारा 4-7। स्रोत दस्तावेज़

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